侵襲/遷移實(shí)驗(yàn)

簡(jiǎn)要描述：細(xì)胞侵襲/遷移實(shí)驗(yàn)將Transwell小室放入培養(yǎng)板中，小室內(nèi)稱上室，培養(yǎng)板內(nèi)稱下室，上下層培養(yǎng)液以聚碳酸酯膜相隔，將研究的細(xì)胞種在上室內(nèi)，由于聚碳酸酯膜有通透性，下層培養(yǎng)液中的成分可以影響到上室內(nèi)的細(xì)胞，應(yīng)用不同孔徑和經(jīng)過不同處理的聚碳酸酯膜，就可以進(jìn)行共培養(yǎng)、細(xì)胞趨化、細(xì)胞遷移、細(xì)胞侵襲等多種方面的研究。

更新時(shí)間：2023-06-29
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實(shí)驗(yàn)

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詳細(xì)介紹

操作步驟
(1)所有細(xì)胞培養(yǎng)試劑和Transwell chamber 放在37°C溫育;
(2)待測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，消化細(xì)胞，用PBS和無(wú)血清培養(yǎng)基先后洗滌一次，用無(wú)血清培養(yǎng)基懸浮細(xì)胞，計(jì)數(shù)，調(diào)整濃度為2X10* /ml;
(3)在下室(即24孔板底部)加入600-800μ 1含10%血清的培養(yǎng)基，上室加入100- 150μ 1細(xì)胞懸液，繼續(xù)在孵箱培養(yǎng)24小時(shí);
(4)用鑷子小心取出chamber,吸干上室液體，移到預(yù)先加入約800μ 1甲醇的孔中，室溫固定30分鐘;
(5)取出chamber，吸千上室固定液，移到預(yù)先加入約800μ 1 Giemsa 染液的.孔中，室溫染色15-30分鐘;
(6)輕輕用清水沖洗浸泡數(shù)次，取出chamber, 吸去上室液體，用濕棉棒小心擦去_上室底部膜表面上的細(xì)胞;
(7)用小鑷子小心揭下膜，底面朝上晾干，移至載玻片上用中性樹膠封片;
(8)顯微鏡下取9個(gè)隨機(jī)視野計(jì)數(shù)，統(tǒng)計(jì)結(jié)果。

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