細(xì)胞劃痕檢測

簡要描述：細(xì)胞劃痕檢測（wound healing）法是簡捷測定細(xì)胞遷移運(yùn)動和修復(fù)能力的方法，類似體外傷口愈合模型。

更新時間：2022-12-23
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詳細(xì)介紹

一、實(shí)驗原理
細(xì)胞劃痕(wound healing)法是簡捷測定細(xì)胞遷移運(yùn)動和修復(fù)能力的方法，類似體外傷口愈合模型，在體外培養(yǎng)皿或平板培養(yǎng)的單層貼壁細(xì)胞上，用微量槍頭或其它硬物在細(xì)胞生長的中央?yún)^(qū)域劃線，去除中央部分的細(xì)胞，然后繼續(xù)培養(yǎng)細(xì)胞至實(shí)驗設(shè)定的時間，取出細(xì)胞培養(yǎng)板，觀察周邊細(xì)胞的生長遷移能力，實(shí)驗通常需設(shè)定正常對照組和實(shí)驗組，實(shí)驗組是加了某種處理因素或藥物、外源性基因等的組別，通過不同分組之間的細(xì)胞對于劃痕區(qū)修復(fù)能力的不同，可以判斷各組細(xì)胞的遷移與修復(fù)能力。
二、實(shí)驗步驟
1、所有要滅菌，直尺和marker筆在操作前紫外照射30min. .
2、先用marker筆在6孔板背后，用直尺比著，大約每隔0.5-1cm一道，橫穿過孔，每孔至少穿過5 條線。

3、在空中加入約5X105個細(xì)胞(具體數(shù)量因細(xì)胞不同而不同，掌握為過夜能鋪滿)，37C培養(yǎng)箱培養(yǎng)。

4、第二天用10μ1槍頭比著直尺，與標(biāo)記線垂直的方向劃兩條平行線，槍頭要垂直，不能傾斜。
5、用PBS洗細(xì)胞3次，去除劃下的細(xì)胞，加入無血清培養(yǎng)基。
6、放入37°C 5% CO2培養(yǎng)箱，按0、6、12、24h倒置顯微鏡觀察，拍照。

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