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細胞培養(yǎng)服務(wù)

簡要描述:細胞培養(yǎng)服務(wù)是指在體外模擬體內(nèi)環(huán)境,使之生存、生長、繁殖并維持主要結(jié)構(gòu)和功能的一種方法。

  • 更新時間:2022-12-22
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詳細介紹

細胞培養(yǎng)服務(wù)細胞復(fù)蘇

將凍存細胞從液氮中取出后,在37℃水浴鍋內(nèi)不斷搖動促進其融化。移入15ml離心管中,加入10ml預(yù)熱的DMEM*培養(yǎng)基,輕輕吹勻,離心,2000rpmX2min,棄上清液。加入10ml DMEM培養(yǎng)基清洗,棄上清液。加入10ml DMEM*培養(yǎng)基,輕輕吹打,接種于10cm盤中,在含5%CO2的細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

細胞培養(yǎng)服務(wù)細胞傳代

細胞密度達到80%~90%時.去培養(yǎng)基,10ml PBS清洗2次。加入3ml含0.25%EDTA的胰蛋白酶,放入細胞培養(yǎng)箱3min。加人1ml DMEM*培養(yǎng)基終止胰酶消化,轉(zhuǎn)移至15ml離心管。加入10ml PBS清洗細胞培養(yǎng)盤,轉(zhuǎn)移至15ml離心管,2000rpmX2min,棄上清液。再加入10ml PBS(經(jīng)高壓滅菌,保存于40°C),吹勻,吸取10微升進行計數(shù),按照1×105/盤接種,在含5%CO2的細胞培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)。

細胞凍存

細胞密度達到80%~90%時,去培養(yǎng)基,10ml PBS清洗2次。加入3ml含0.25%EDTA的胰蛋白酶,放入細胞培養(yǎng)箱3min。加入lmlDMEM*培養(yǎng)基終止胰酶消化,轉(zhuǎn)移至15ml離心管。加入10ml PBS清洗細胞培養(yǎng)盤,轉(zhuǎn)移至15ml離心管,2000rpmX2min,棄上清液。加入1ml凍存液(90%血清,10%DMSO),放入凍存盒內(nèi)(盒內(nèi)有異丙醇,以保證溫度降低的速度),立即放入一80℃冰箱內(nèi),過夜,第二天放入液氮中,可以保存至少兩年,如不放入液氮,可以保存三個月。

凍存液的配制:70%的*培養(yǎng)基+20%FBS+10%DMSO.DMSO要慢慢滴加,邊滴邊搖。

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