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實時熒光定量PCR檢測

簡要描述:實時熒光定量PCR檢測 PCR擴增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針,該探針為一寡核苷酸,兩端分別標記一個報告熒光基團和一個淬滅熒光基團。探針完整時,報告基團發(fā)射的熒光信號被淬滅基團吸收;剛開始時,探針結合在DNA任意一條單鏈上;PCR擴增時,Taq酶的5'端一3'端外切酶活性將探針酶切降解,使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離,從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號。

  • 更新時間:2022-12-22
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詳細介紹

聚合酶鏈式反應(Polymerase Chain Reaction,PCR)自誕生之日起就決定了它不僅是一種高敏感、高特異的檢測核酸分子的定性方法,而且也是一個能對核酸分子進行定量的有力工具。1996年,美國Applied Biosystems公司推出了一種新定量試驗技術間實時熒光定量PCR它是通過熒光染料或熒光標記的特異性探針對PCR產物進行標記跟蹤;實時在線監(jiān)控反應過程,結合相應的軟件可以對產物進行分析,計算待測樣品模板的初始濃度。

實時熒光定量PCR服務內容:
PCR擴增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針,該探針為一寡核苷酸,兩端分別標記一個報告熒光基團和一個淬滅熒光基團。探針完整時,報告基團發(fā)射的熒光信號被淬滅基團吸收;剛開始時,探針結合在DNA任意一條單鏈上
;PCR擴增時,Taq酶的5'端一3'端外切酶活性將探針酶切降解,使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離,從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號,即每擴增一條DNA鏈,就有一個熒光分子形成,實現了熒光信號的累積與PCR產物形成*同步。

實時熒光定量PCR樣品準備條件:
細胞樣品:收集細胞后放入液氮中速凍保存或速東24h后轉入-80°C冰箱保存;收集細胞后,視細胞量,直接加入1-1.5mL Trizol溶解裂解細胞,再轉入-80°C冰箱保存。
組織樣品:動物組織一般取材后立即放入液氮中速凍保存,液氮凍存24h后可轉入-80°C冰箱保存;組織樣品同樣可以采用Trizol溶解裂解后放入-80°C冰箱保存。特殊組織(植物等)建議采用新鮮組織即刻提取RNA,逆轉合成cDNA后-20°C保存?zhèn)溆谩K袠悠返奶幚砗捅4孢^程中,切總反復凍融。

樣品運輸條件:樣品運輸條件根據實驗樣品的處理條件,可以選擇液氮或者干冰運輸。

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