一、實(shí)驗(yàn)原理

    各種細(xì)胞操作，包括傳代、凍存和原代組織的分離，均能導(dǎo)致細(xì)胞死亡。為了確定群體細(xì)胞中的存活細(xì)胞數(shù)，可采用臺盼藍(lán)染料排斥實(shí)驗(yàn)（Phillips 1973)。正常的健康細(xì)胞能排斥染料，但細(xì)胞膜完整性喪失后臺盼藍(lán)可彌散入細(xì)胞內(nèi)。染料排斥實(shí)驗(yàn)是一種粗糙的估計(jì)細(xì)胞活力的方法，無法區(qū)別 10%~20% 的活力差異。除此之外，排斥染料的細(xì)胞有可能不貼壁或不能較長時(shí)問生存或繁殖。

    二、實(shí)驗(yàn)方法

    1) 胰蛋白酶處理細(xì)胞，無菌狀態(tài)下取 0.5 ml 細(xì)胞用 PBS 稀釋至每毫升 2X105~4X105。

    2) 向另一管中無菌加人 0.5 ml 上述細(xì)胞稀釋液，并加人 0.5 ml 臺盼藍(lán)溶液 (0.4%）

    3) 細(xì)胞在染料中停留時(shí)間為不短于 3 分鐘、不超過 10 分鐘, 用毛細(xì)吸管取含染料的細(xì)胞懸液，靠毛吸作用使其進(jìn)入計(jì)數(shù)器內(nèi)。

    4) 至少計(jì)數(shù)總數(shù) 500 個(gè)細(xì)胞，藍(lán)色細(xì)胞單獨(dú)計(jì)數(shù)。記錄不排斥染料的藍(lán)色細(xì)胞的出現(xiàn)頻度。

    5) 根據(jù)不排斥染料的細(xì)胞數(shù)計(jì)數(shù)細(xì)胞的活力百分比。

    例如：單層細(xì)胞胰蛋白酶處理后重懸于 5 ml 培養(yǎng)液中, 取 0.5 ml 細(xì)胞與 4.5 ml PBS 混勻，吸取 0.5 ml 懸浮于 PBS 中的細(xì)胞加于另一小管中，再加人 0.5 ml 臺盼藍(lán)溶液混勻。上述懸液加于計(jì)數(shù)器上，共計(jì)數(shù) 540 個(gè)細(xì)胞，62 個(gè)細(xì)胞不排斥染料呈藍(lán)色，活性百分比為 88.5%。